Heterophilic Blocking ReagentFrequently Asked questions

異嗜性抗體阻斷劑HBR常見問答

Q1:你需要HBR嗎?

如果您符合以下描述，HBR值得您一試

1. 正在研發(fā)來心法免疫試劑盒
2. 遭遇過假陽性樣本的困擾
3. 需鑒別樣本為真陽性還是假陽性
4. 檢測結(jié)果受到HAMA或異嗜性抗體干擾
5. 需區(qū)分假陽性樣本的干擾類別
6. 需要一個通用阻斷劑用于各種檢測系統(tǒng)

Q2:什么是異嗜性抗體干擾?

病人血清/血漿中的內(nèi)源性異惰性抗體，可結(jié)合其他種屬的免疫球蛋白，包括作為免疫分析試劑的異源抗體，這些抗體會干擾免疫檢驗體系，造成與實際分析物濃度無關(guān)的虛高檢測值，可能導(dǎo)致誤診。

異嗜性抗體可以影響各種檢測，但對夾心法免疫檢驗影響最大。

Q3:異嗜性抗體干擾的原理?

夾心法免疫檢測至少使用兩種針對抗原不同表位的抗體，捕獲抗體包被在固相，標(biāo)記抗體游離在溶液中。正常情況下，樣本中的抗原連接兩種抗體，標(biāo)記抗體結(jié)合到固相的量與樣本中的抗原濃度成正比(圖1)。

異嗜性抗體在抗原不存在的情況下，也可以橋連這兩種抗體，使得結(jié)合到固相的標(biāo)記抗體濃度升高(圖2)，造成假陽性結(jié)果。

Q4：HBR如何超越傳統(tǒng)的阻斷方法?

傳統(tǒng)的被動阻斷法，使用非特異性物質(zhì)(鼠lgG,鼠血清，非特異性的單克隆抗體，聚合IgG等)，阻斷人類異嗜性抗體的結(jié)合。所有方法的阻斷效果皆依賴人類異嗜性抗體的親合力。通常人類異嗜性抗體的親合力K值在10 5-10°范圍內(nèi)。HBR以完全不同的方法來實現(xiàn)阻斷。HBR能特異性結(jié)合人類異嗜性抗體，產(chǎn)生位阻效應(yīng)，阻止干擾。HBR特異性結(jié)合物的親合力K值約109。

HBR的特異性，加上千倍于傳統(tǒng)方法的親合力，使得HBR具有以下優(yōu)點，超越傳統(tǒng)阻斷方法:

1. 使用HBR,只需少量蛋白質(zhì)作封閉，不減弱檢測信號。
2. HBR比傳統(tǒng)方法能阻斷更多假陽性。
3. HBR可阻斷抗所有種屬(anti-rabbit,anti-goat,an-sheep&anti-mouse)的反應(yīng).
4. HBR可阻斷抗鼠單克隆抗體的所有亞型(如anti-mouse IgG1,anti-mouse lgG2等)
5. 使用HBR，不限定于某些檢測?？勺鳛橥ㄓ迷噭┦褂?。

Q5:異嗜性干擾的普遍性?

1. 現(xiàn)在已知干擾因素是免疫球蛋白，目前已發(fā)現(xiàn)IgG和lgM異嗜性抗體。
2. 異嗜性干擾發(fā)生率很高。依病人人口而別，有高達(dá)40%發(fā)生率的報道。至少有10%的案例有據(jù)可考。
3. 不同樣本的干擾程度不同，同一病人樣本的干擾程度也會隨時間而變化。
4. 異嗜性抗體并非針對特定種屬，可與多種動物抗體結(jié)合。
5. 異嗜性抗體并非單一和特異的實體，而是一個多成分的現(xiàn)象，包含多種可造成干擾的抗體，因此干擾并不限于基于單抗的檢測體系。
6. 干擾可能由所用抗體的Fc片段介導(dǎo)。EIA似乎較RIA更易受到干擾。

Q6:異嗜性抗體從何而來?

有許多可誘發(fā)病人體內(nèi)產(chǎn)生異嗜性抗體的因素!其中包括:

1. 動物接觸(馴獸師，獸醫(yī))
2. 動物產(chǎn)品接觸(烹飪)
3. 注射疫苗
4. 輸血
5. 自身免疫性疾病
6. 透析
7. 母嬰傳遞類
8. 風(fēng)濕因子也可產(chǎn)生異嗜性抗體效果
9. 動物輔助治療(胸腺細(xì)胞、羊細(xì)胞、胚胎細(xì)胞)
10. 特定食物(奶酪)
11. 心肌病變
12. 秘方藥物
13. 腸胃炎(E,Coli)

Q7:異嗜性抗體和融融的區(qū)別?

異端性抗體是一個通稱，用于描述能夠結(jié)合動物抗體從而干擾免疫分析的所有人源抗體。

HAMA是異嗜性抗體中的一種，結(jié)合鼠源抗體。

Q8:怎樣確認(rèn)異嗜性干擾

1，將樣本倍數(shù)稀釋后再檢測，若測值呈非線性，說明存在干擾物

2，同一樣本采用不同檢測方法，若結(jié)果大相徑庭說明存在干擾物。

3，同一樣本添加阻斷劑與未添加阻斷劑的檢測結(jié)果不一致，說明存在干擾物。

4，用親和色譜法去除樣本中的目標(biāo)分析物，再常規(guī)檢測，若檢測信號未消失，說明存在干擾物。

Q9:什么是阻斷劑?

阻斷劑是一種生物制劑，加入免疫檢驗體系中，可結(jié)合異嗜性抗體，從而有效防止非分析物介導(dǎo)的抗體相連。

目前有兩種主要的阻斷劑：

HAMA類阻斷劑(Human Anti--Mouse Antibodies)

1，HAMA類阻斷劑只阻斷一種人抗特定動物抗體的活性(如人類抗鼠抗體)，通常為非針對目標(biāo)分析物的正常血清、正常IgG、單克隆抗體等。

2，這類“被動阻斷劑”被過量地加入樣本中，使得樣本卟!的種屬特異性抗體優(yōu)先于低濃度的分析物與之結(jié)合。

3，這類試劑用途有限，因為僅能排除異嗜性干擾的一部分，而異嗜性干擾涉及許多成分。人們經(jīng)常發(fā)現(xiàn)，IgG在一個雙單抗夾心法檢測體系中，只能糾正部分界嗜性干擾。

真正的異嗜性抗體阻斷劑(HBR)

1，這種抑制劑可排除各種異嗜性干擾

2，內(nèi)含“主動阻斷劑”，對造成干擾的異嗜性抗體具特異性結(jié)合力

3，只需低濃度即可高效阻斷，將影響減到最低。

Q10:理想的異嗜性抗體阻斷劑的特點

1，必須能夠糾正任何樣本中的干擾，不管干擾是種屬特異性抗體還是類風(fēng)濕因子造成的。

2，必須是低濃度、高效能的，不會產(chǎn)生劑量一反應(yīng)曲線

3，不應(yīng)影響真陽性樣本的稀釋線性

4，必須有很好的重復(fù)性，無批間差

5，必須長期穩(wěn)定

6，必須經(jīng)濟實用

7，必須簡便易用，可直接添加到免疫試劑中，無需額外試劑或樣本處理步驟

Q11:Scantibodles的HBR的特性?

Scantibodies HBR是專為對抗免疫檢測中邦嗜性干擾問題設(shè)計的卓越產(chǎn)品，是用來特異性中和異嗜性抗體的具有獨特結(jié)構(gòu)的免疫球蛋白。純度高于95%。

不同于其他廠家供應(yīng)的非特異性“被動阻斷劑”(過量使用以確保優(yōu)先于分析物結(jié)合異端性抗體)，Scantibodies HBR是靶向針對異嗜性抗體的“主動阻斷劑”，有效中和其干擾。

可阻斷的假陽性類型包括：

a人抗鼠抗體(HAMA)

b人抗山羊抗體

c人抗綿羊抗體

d人抗兔抗體

e類風(fēng)濕因子

廣泛特異性使得Scantibodies HBR可作為“通用試劑”,在各種常見的雙抗體試劑盒中均可使用。

Scantibodies HBR為高特異性高純度的試劑，極低濃度即夠使用(只需正常小鼠IgG用量的百分之或千分之一)，對檢測信號無不良影響。

Scantibodies HBR不干擾人血清中分析物的加入或還原。

Scantibodies HBR不干擾真正陽性病人樣本的稀釋線性。

Scantibodies HBR批間重復(fù)性高。

Scantibodies HBR效期五年，品質(zhì)穩(wěn)定。

Scantibodies HBR的使用成本低于鼠IgG或鼠血清。

Scantibodies HBR可直接加入到檢測緩沖液或結(jié)合液等。

Scantibodies的HBR是高純度的IgG制劑，以液體形式供應(yīng)，不含防腐劑。產(chǎn)品附以下說明，純化方法、純度(SDS-P船E)、緩沖液組分、保存條件、效期、外觀等。

HBR使用步驟:

解凍HBR后輕輕倒置搖勻(不要產(chǎn)生氣泡)將HBR直接加入結(jié)合液，使最終每如管中的HBR為40ug.

以3KC533 HBR-I(20mg/ml)為例：

A.解凍HBR，加2ml(即40mg)到25ml結(jié)合液中。

B.用稀釋緩沖液將上述HBR結(jié)合液補足到100ml.

C.混勻，現(xiàn)每100uL準(zhǔn)備液中含40ulHBR.向每孔管中加入準(zhǔn)備液100uL.

D.繼續(xù)實驗的其他步驟、此為建議的HBR起始濃度，客戶需根據(jù)其檢驗類型和樣本的異嗜性干擾情況進(jìn)行優(yōu)化。

局限性

1使用HBR后所得的實驗結(jié)果應(yīng)結(jié)合醫(yī)師的其他數(shù)據(jù)(癥狀、其他化驗結(jié)果、臨床反應(yīng)等)使用。

2,在某些異嗜性干擾特別強的樣本中，HBR可能不能完全阻斷干擾。

性能特點

典型CA125檢驗中的異嗜性干擾：

產(chǎn)品：CA125檢側(cè)試劑盒

平行操作CA125和經(jīng)HBR處理的CA125檢驗。

樣本總數(shù)=585

檢測到的陽性樣本中：54例確認(rèn)為假陽性(線性稀釋法)，其中46例經(jīng)HBR處理后可糾正，9例經(jīng)HBR處理后，用線性稀釋法襝羽仍表現(xiàn)為非線性結(jié)果。

因此，[(9/46×54)+585]×100%=1.8%

未受HBR影響。

主要制造商的CEA產(chǎn)品襝驗中的異嗜性干擾：

產(chǎn)品：CEA檢測試劑盒

平行操作CEA和經(jīng)HBR處理的CEA檢測。

樣本總數(shù)=96，檢測到的陽性樣本中：，89例確認(rèn)為假陽性（線性稀釋法），其中74例經(jīng)HBR處理后結(jié)果呈線性，5例經(jīng)HBR處理后，線性稀釋法測定仍表現(xiàn)為非線性結(jié)果。

因此，[（5/74*89）/396]*100％=1.5％

未受HBR影響

商品信息：為試劑盒研發(fā)推薦

商品信息_為試劑盒生產(chǎn)廠商推薦