膠體金制備方法簡單，產(chǎn)用還原法制備膠體金。常采用的還原劑有檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷、硼氫化鈉等。本文總結(jié)了五種制備膠體金顆粒的常用的方法，具體如下：

1、枸櫞酸三鈉還原法

(1)10nm膠體金粒的制備：取0.01%HAuCl4水溶液100ml，加入1%枸櫞酸三鈉水溶液3ml，加熱煮沸30min，冷卻至4℃，溶液呈紅色。

(2)15nm膠體金顆粒的制備：取0.01%HAuCl4水溶液100ml，加入1%枸櫞酸三鈉水溶液2ml，加熱煮沸15min～30min，直至顏色變紅。冷卻后加入0.1Mol/LK2CO30.5ml，混勻即可。

(3)15nm、18nm～20nm、30nm或50nm膠體金顆粒的制備：取0.01%HAuCl4水溶液100ml，加熱煮沸。根據(jù)需要迅速加入1%枸櫞酸三鈉水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，繼續(xù)煮沸約5min，出現(xiàn)橙紅色。這樣制成的膠體金顆粒則分別為15nm、18～20nm、30nm和50nm.

2、鞣酸-枸櫞酸鈉還原法

A液：1%HAuCl4水溶液1ml加入79ml雙餾水中混勻。

B液：1%枸櫞酸三鈉4ml，1%鞣酸0.7ml，0.1Mol/LK2CO3液0.2ml，混合，加入雙餾水至20ml.

將A液、B液分別加熱至60℃，在電磁攪拌下迅速將B液加入A液中，溶液變藍(lán)，繼續(xù)加熱攪拌至溶液變成亮紅色。此法制得的金顆粒的直徑為5nm.如需要制備其它直徑的金顆粒，則按表15-1所列的數(shù)字調(diào)整鞣酸及K2CO3的用量。

表1鞣酸-枸櫞酸鈉還原法試劑配制表

3、檸檬酸三鈉還原法制備金溶膠

取0、01%氯金酸水溶液100ml加熱至沸，攪動(dòng)下準(zhǔn)確加入1%檸檬酸三鈉水溶液0.7ml，金黃色的氯金酸水溶液在2分鐘內(nèi)變?yōu)樽霞t色，繼續(xù)煮沸15分鐘，冷卻后以蒸餾水恢復(fù)到原體積，如此制備的金溶膠其可見光區(qū)最高吸收峰在535nm，A1cm/535=1.12。金溶膠的光散射性與溶膠顆粒的大小密切相關(guān)，一旦顆粒大小發(fā)生變化，光散射也隨之發(fā)生變異，產(chǎn)生肉眼可見的顯著的顏色變化，這就是金溶膠用于免疫沉淀或稱免疫凝集試驗(yàn)的基礎(chǔ)。

金溶膠顆粒的直徑和制備時(shí)加入的檸檬酸三鈉量是密切相關(guān)的，保持其他條件恒定，僅改變加入的檸檬酸三鈉量，可制得不同顏色的金溶膠，也就是不同粒徑的金溶膠，見附表。

附表100ml氯金酸中檸檬酸三鈉的加入量對(duì)金溶膠粒徑的影響

1%檸檬酸三鈉ml0.300.450.701.001.502.00

金溶膠顏色藍(lán)灰紫灰紫紅紅橙紅橙

吸收峰(nm)220240535525522518

徑粒(nm)14797.571.54124.515

4、檸檬酸三鈉-鞣酸混合還原劑

用此混合還原劑可以得到比較滿意的金溶膠，操作方法如下：取4ml1%檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7.2H2O)，加入0~5ml1%鞣酸，0~5ml25mmo/LK2CO3(體積與鞣酸加入量相等)，以雙蒸餾水補(bǔ)至溶液最終體積為20ml，加熱至60℃取1ml1%的HAuCl4，加于79ml雙蒸餾水中，水浴加熱至60℃，然后迅速將上述檸檬酸-鞣酸溶液加入，于此溫度下保持一定時(shí)間，待溶液顏色變成深紅色(約需0.5~1小時(shí))后，將溶液加熱至沸騰，保持沸騰5分鐘即可。改變鞣酸的加入量，制得的膠體顆粒大小不同。

5、白磷還原法

在120ml雙蒸餾水中加入1.5ml1%氯金酸和1.4ml0.1mol/LK2CO3，然后加入1ml五分之一飽和度的白磷乙醚溶液，混勻后室溫放置15分鐘，在回流下煮沸直至紅褐色轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色。此法制得的膠體金直徑約6nm，并有很好的均勻度，但白磷和乙醚均易燃易爆，一般實(shí)驗(yàn)室不宜采用。

要得到大小更均勻的膠體金顆粒，可采用甘油或蔗糖密度梯度離心，經(jīng)分級(jí)后制得膠體金顆粒直徑的變異系數(shù)(CV)可小于15%。

制備膠體金所使用的還原劑不同，膠體金顆粒大小會(huì)有所不同。免疫膠體金技術(shù)以其獨(dú)特點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn)，在生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。